Реакция агглютинации, ее виды. Реакция агглютинации (РА) Расшифровка результатов теста простым методом

Агглютинация (лат. agglutinatio – склеивание) – склеивание в комочки эритроцитов, лейкоцитов и других клеточных элементов с адсорбированными на их поверхности антигенами и антителами и выпадение их в осадок при воздействии электролитов.

Реакция агглютинации бывает:

• специфическая;
• неспецифическая, или химическая;
• спонтанная.

Для проведения специфической агглютинации необходимо наличие 3-ех компонентов:

1. агглютиногена – взвеси клеток антигенов;
2. агглютининов – антител, которые образуются в организме человека при появлении в нем микробов;
3. электролитов – в их изотоническом растворе ставят реакцию.

Чтобы образовался агглютинат (осадок), необходимо соблюдать правильное соотношение антигенов и антител. Такое соотношение называется феноменом оптимума . Если антитела будут находиться в меньшем или большем количестве, чем следует, произойдет задержка реакции.

Агглютинины, используемые в реакции, делятся на групповые и специфические:

• Групповые реагируют не только на микробы, которые были использованы для иммунизации, но и на микробы, имеющие с ними общие антигены;
• Специфические агглютинины обуславливают реакцию агглютинации только с микробами, которые использовались для иммунизации.

Для освобождения сыворотки от групповой агглютинации её разводят или применяют Кастеллани реакцию.

Реакция агглютинации используется для того, чтобы определить вид микроба, и чтобы обнаружить антитела в сыворотках вакцинированных или больных людей. Существует большое количество реакций агглютинации, при помощи которых можно диагностировать вирусные заболевания, например, сыпной или брюшной тиф, парафиты.

Для постановки реакции в пробирках разводят сыворотку в отношении 1:50; 1:100; 1:200; 1:400; 1:800; 1:1000 и так далее. Затем в пробирки добавляют одинаковое количество микробной взвеси. Пробирки помещаются в термостат, где содержатся при температуре +37 градусов в течение 2 часов, затем проводится предварительный учет. Окончательный учет производят на следующий день, все это время пробирки содержатся при комнатной температуре.

Агглютинация может быть определена макроскопически, то есть невооруженным глазом, или микроскопически, с использование .

Реакция агглютинации (РА) оценивается в крестах в зависимости от степени просветления жидкости и получившегося осадка :

1. — ++++ — полное просветление раствора, появление осадка в виде зонтика, который при встряхивании разбивается на хлопья;
2. — +++ — слегка подкрашенная жидкость;
3. — ++ — мутная жидкость, незначительный осадок;
4. — + — отрицательная реакция, мутная жидкость без осадка, либо осадок разбивается равномерно.

Неспецифическая агглютинация возникает от изменения pH среды, спонтанная наблюдается при суспендировании бактерий, которые находятся в R-форме, в физиологическом растворе и при нагревании.

/ 49
ХудшийЛучший

В этих реакциях принимают участие антигены в виде частиц (микробные клетки, эритроцита и другие корпускулярные антигены), которые склеиваются антителами и выпадают в осадок.

В зависимости от вида используемого иммунодиагностикума различают реакцию микробной агглютинации, гемагглютинации, латекс-агглютинации, коагглютинации и т. д.

Для диагностики инфекционных заболеваний реакцию агглютинации проводят в двух направлениях: определяют вид выделенного от больного микроба-возбудителя с помощью диагностической агглютинирующей сыворотки (серологическая идентификация микроба) и обнаруживают специфические антитела в сыворотке больного, используя стандартный микробный диагностикум (серодиагностика заболевания, постановка серологического диагноза).

Различают прямую и непрямую реакции агглютинации

Реакция прямой агглютинации микробов (РА). В этой реакции антитела (агглютинины) непосредственно агглютинируют корпускулярные антигены (агглютаногены). Обычно они представлены взвесью инактивированных микроорганизмов (реакция микробной агглютинации). По характеру образующегося агглютината различают зернистую и хлопьевидную агглютинацию. Зернистая агглютинация происходит при склеивании микробов, содержащих О-антиген. Бактерии, имеющие жгутики (Н-антиген), агглютинируются с образованием крупных хлопьев.

Для определения вида микроорганизмов используют стандартные диагностические агглютинирующие сыворотки. Их получают гипериммунизацией лабораторных животных взвесью бактерий. Титром такой сыворотки является ее наибольшее разведение, при котором наблюдается отчетливая агглютинация соответствующего антигена. Однако из-за сложности антигенной структуры бактерий, агглютинирующие сыворотки содержат антитела не только к видоспецифическим, но и к групповым антигенам и могут давать групповую агглютинацию с родственными видами бактерий. Титры антител к видоспецифическим антигенам в сыворотке всегда выше, чем к групповым. Для удаления группоспецифических антител в сыворотку последовательно добавляют микроорганизмы, в состав которых входят групповые антигены (метод Кастеллани). Таким методом получают адсорбированные сыворотки, которые содержат антитела к определенному виду микроба.

Методы реакции агглютинации. Наиболее распространены пластинчатая (ориентировочная) и развернутая РА. Пластинчатую РА ставят на стекле. В этой реакции используют сыворотки с небольшим разведением или неразведенные. Используют ее как ускоренный метод обнаружения антител или идентификации микроорганизмов. На стекло наносят каплю сыворотки, в которую петлей вносят неизвестную культуру бактерий, перемешивают и через 2-3 минуты наблюдают появление мелкозернистой или хлопьевидной агглютинации. Для контроля используют каплю физиологического раствора, в которой после внесения бактерий наблюдается помутнение. При использовании неадсорбированных сывороток реакция на стекле имеет только ориентировочное значение.

Развернутую РА проводят в пробирках или лунках пластин. При этом диагностическую сыворотку разводят до титра и вносят одинаковые количества антигена. При положительном результате на дне пробирки образуется рыхлый осадок в виде " зонтика", при отрицательном - осадок в виде " пуговицы". Поскольку титры группоспецифических антител в сыворотке значительно ниже, чем титр видоспецифических, групповые реакции наблюдаются лишь в небольших разведениях сыворотки. Если агглютинация происходит до титра или до половины титра сыворотки, она является видоспецифэтеской.

Для определения антител в сыворотке больного (серологический диагноз) используют стандартный микробный диагностикум, содержащий взвесь известных микробов или их антигенов. В этом случае также можно ставить пластинчатую и развернутую РА.

Реакция прямой агглютинации клеток. Для определения групп крови используют стандартные сыворотки крови доноров, содержащие известные анти-А или анти-В антитела. Реакции ставят на стекле или пластинах. При наличии на эритроцитах А (2-я группа крови), В (3-я группа крови) или обоих антигенов (4-я группа крови) соответствующие сыворотки агглютинируют эритроциты. Применяется также проба на совместимость крови, когда капли крови донора и реципиента смешивают и оценивают агглютинацию.

В клиниках применяют реакцию агглютинации лейкоцитов, тромбоцитов и других клеток для выявления аутоантител, а также для определения антигенов на этих клетках.

Реакция непрямой (пассивной) агглютинации. Для получения феномена агглютинации антиген предварительно адсорбируют на корпускулярном носителе, которым служат инертные частицы (латекс, целлюлоза, полистирол, оксид бария и др.) или клетки (эритроциты барана, I(0)-группы крови человека).

В реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) в качестве носителя используют эритроциты. Нагруженные антигеном эритроциты склеиваются в присутствии специфических антител к данному антигену и выпадают в осадок. Сенсибилизированные антигеном эритроциты используют в РПГА как эритроцитарный антигенный диагностикум для обнаружения антител (серодиагностика, установление серологического диагноза). Если нагрузить эритроциты антителами, то их можно применять для выявления антигенов.

Прямая и непрямая антииммуноглобулиновые реакции Кумбса. Используются для выявления " неполных" (неагглютинирующих) антител, которые образуются при различных заболеваниях: резус-конфликте, аутоиммунных заболеваниях, некоторых инфекциях. Для постановки этих реакций необходима антиглобулиновая сыворотка, которую получают путем иммунизации кролика иммуноглобулинами человека. Такая сыворотка содержит полные (бивалентные) антитела-антииммуноглобулины.

Прямая реакция: к отмытым эритроцитам крови больного добавляют антииммуноглобулиновую сыворотку. Если на эритроцитах есть неполные антитела (иммуноглобулины), что наблюдается при гемолитической анемии, резус-конфликте (эритроциты плода), то они агглютинируются.

Непрямая реакция выявляет свободные антиэритроцитарные антитела в сыворотке крови больного. К этой сыворотке добавляют отмытые эритроциты донора 0(I) группы крови. Смесь инкубируют при 37°С в течение 30 минут и отмывают эритроциты. Затем к ним добавляют антииммуноглобулиновую сыворотку. Если в сыворотке больного были неполные антиэритроцитарные антитела, то наступит агглютинация.

Агглютинация крови — это склеивание и оседание в виде осадка эритроцитов, бактерий и других клеток, которые несут антигены.

Процесс происходит под воздействием агглютининов, которые являются специфическими веществами. В роли этих веществ выступают лектины или антитела.

Возможные виды агглютинации при определении группы крови

Агглютинация бывает специфической и неспецифической. В первом случае реакция происходит с участием трех компонентов:

• антигенов;
• антител;
• электролитов (применяется изотонический раствор).

Используются все возможные виды агглютинации при определении группы крови, однако это не единственный случай.

С какой целью используется?

Реакция агглютинации крови применяется для того, чтобы выявить возбудителя инфекционного заболевания. При этом он оседает, и его легко обнаружить в осадке. Данный процесс используется, как уже упоминалось выше, и при Именно об этом и пойдет речь дальше.

Каковы особенности?

Эритроциты содержат антигены типа А и В. Они связываются с антителами ά и β соответственно. Группы крови и реакции агглютинации:

• 1, 0 (ά, β) - отсутствуют антигены на поверхности эритроцитов;
• 2, А (β) - присутствует антиген А и антитело β;
• 3, В (ά) - содержится антиген В и антитело ά;
• 4, АВ (00) - присутствуют два антигена, антитела отсутствуют.

Стоит отметить, что антигены уже наблюдаются у эмбриона. Что касается антител, они появляются после рождения, на первом месяце жизни.

От группы крови зависит совместимость людей. В этом и состоит причина отторжения плода организмом матери. Другими словами, у нее присутствуют антитела к антигенам крови будущего ребенка. В этом случае возникает несовместимость. Кроме того, группа крови обязательно учитывается при переливании.

Подготовка

Группы крови и реакции агглютинации — совместимые понятия, которые зачастую используются в медицине.

Перед тестом важно придерживаться определенных инструкций. Следует на время исключить употребление некоторых продуктов и лекарственных препаратов. Это поможет сделать результаты более точными. Рекомендации, которых нужно придерживаться, назначает врач. Дело в том, что у разных лабораторий могут не совпадать диапазоны полученных значений, то есть они немного отличаются.

Условия для проведения теста

Чтобы группа крови была определена точно, важно подобрать правильное оснащение. К таковому относятся:

• и пипетка;
• стеклянные палочки;
• стандартные изогемагглютинирующие сыворотки;
• сухие фаянсовые тарелки, которые разделены на 4 сектора.

Существуют требования и к условиям проведения теста:

• дневное освещение;
• температура в помещении выше +16 ˚С;
• использование объемов крови и сыворотки в соотношении 1:10;
• достоверные результаты получаются в течение 5 минут.

Выше представлены основные условия и инструменты. Агглютинация крови может проводиться несколькими способами, и каждый из них выдвигает индивидуальные требования.

Методы

Возможные методы определения группы крови с помощью агглютинации:

• стандартный метод;
• перекрестная реакция;
• использование цоликлонов;
• экспресс-методика с применением набора «Эритротест-группокарт».

Стандартный метод

Агглютинация крови проявляется с использованием эритроцитов пациента. Также применяются стандартные сыворотки, которые содержат известные антигены.

На плоскую тарелку размещается по 1 капле четырех сывороток. Затем с помощью стеклянных палочек на нее вносится кровь пациента, подлежащая исследованию. В данном случае удобно использовать глазные пипетки. Следует придерживаться соотношения 1:10. Сыворотка и кровь осторожно перемешивается. В течение пяти минут можно проводить оценку.

Расшифровка результатов теста простым методом

По истечении указанного времени в каплях сыворотки наблюдается просветление. В некоторых можно увидеть, что агглютинация эритроцитов произошла (мелкие хлопья), в других она отсутствует.

Существуют следующие варианты:

• реакции нет во всех пробах сывороток − 1 группа;
• свертывание произошло везде, кроме 2 пробы - 2 группа;
• отсутствие реакции только в 3 пробе - 3 группа;
• агглютинация произошла везде - 4 группа.

Таким образом, главное — правильно распределить сыворотки. Тогда расшифровать результат не составит труда. Если агглютинация крови проявляется слабо, рекомендуется провести анализ повторно. В случае с мелкими хлопьями их рассматривают под микроскопом.

Перекрестная реакция

Иногда простым способом невозможно точное определение группы крови. Агглютинация в таком случае проводится с помощью метода перекрестной реакции. В отличие от первого варианта теста, важное значение здесь имеют стандартные эритроциты. Кровь пациента набирается в пробирку, центрифугируется, а затем пипеткой откачивается сыворотка для дальнейших исследований.

Она в количестве 2 капель помещается на тарелку, потом в нее добавляются стандартные эритроциты групп А и В. Содержимое размешивается путем покачивания емкости.

Результаты метода перекрестной реакции

Через пять минут пробы готовы к рассмотрению. Варианты такие:

• склеивание произошло в обеих каплях - 1 группа;
• хлопья не наблюдаются ни в одной из проб - 4 группа;
• процесс виден в одном образце - 2 или 3 группа (в зависимости от того, где именно свернулась кровь).

Метод с использованием цоликлонов

Для определения группы крови агглютинация таким способом проводится с применением синтетических заменителей сывороток. Они называются цоликлонами. В них содержатся искусственные заменители ά и β-агглютинов, известных как эритротесты (розового и синего цвета соответственно). Реакция происходит между ними и эритроцитами крови пациента.

Такой метод является самым точным и надежным. В основном он не требует повторного проведения исследования. Оценка результатов осуществляется аналогичным образом, как в случае стандартного метода. Особенность состоит в том, что должна обязательно быть подтверждена реакцией со специфическим синтетическим заменителем (анти-АВ). Кроме того, в ней не наблюдается склеивание при добавлении раствора хлорида натрия.

Экспресс-методика с набором «Эритротест-группокарт»

Рассматривая возможные методы анализа при определении группы крови, стоит отметить, что данный способ имеет свои особенности. Они заключаются в том, что результат можно оценить не только в лаборатории, но и в полевых условиях. Для проведения исследования используется специальный набор. Он включает в себя карточку с лунками, на дне которых уже присутствуют высушенные реагенты. Помимо анти-АВ, анти-А и анти-В, применяется анти-D, позволяющий определить резус-фактор.

Этот метод не требует особой подготовки, разрешено использовать кровь, которая взята из пальца, допускается наличие в ней консервантов. Сначала необходимо внести в каждую лунку по капле воды, чтобы растворить ингредиенты. После этого добавляется кровь, слегка размешивается. Через три минуты будет получен результат.

Ложная агглютинация

Иногда данные, полученные после проведения теста, не соответствуют действительности. Такое явление зависит от определенных факторов.

Выделяют три вида ложной реакции:

Псевдоагглютинация. Истинное склеивание не происходит, эритроциты просто складываются в виде монетных столбиков. Если добавить пару капель физиологического раствора, они распадаются. Подобное явление распознается под микроскопом.

Холодная агглютинация крови. Такая реакция наблюдается в том случае, если условия для проведения исследования были неблагоприятными. Когда температура ниже +16 ˚С, может проявляться склеивание.

Панагглютинация. При наличии инфекции в крови результаты тестов могут быть ложными. Такое явление также возможно в случае с онкологическими заболеваниями, при сепсисе.

Агглютинация очень важна в медицине. Она позволяет не только определять группу крови, но и выявлять возбудителя заболеваний, а также наличие инфекций. Главное, придерживаться рекомендаций врача при подготовке к данной процедуре. Что касается медицинского персонала, его задача состоит в создании благоприятных условий и соблюдении всех правил. Только таким образом можно добиться точных результатов при выполнении агглютинации крови.

Агглютинация специфическая А., обусловленная взаимодействием корпускулярного антигена со специфическими антителами.

Большой медицинский словарь . 2000 .

Смотреть что такое "агглютинация специфическая" в других словарях:

АГГЛЮТИНАЦИЯ - АГГЛЮТИНАЦИЯ, выпадение в осадок бактерий или других клеточных элементов при воздействии на них сыворотки невосприимчивого (иммунного) к ним животного. Свойство сыворотки вызывать агглютинацию объясняется по теории Эрлиха (см. Иммунитет)… … Большая медицинская энциклопедия

Специфическая А. клеток или бактерий, наступающая под действием антител, направленных к групповым (общим) антигенам … Большой медицинский словарь

I Агглютинация (лат. agglutinatio склеивание) склеивание и выпадение в осадок взвешенных частиц (бактерий, эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов, клеток тканей), а также поверхностно активных частиц с адсорбированными на них антигенами и… … Медицинская энциклопедия

I Мононуклеоз инфекционный (mononucleosis infectiosa; греч. monos один + лат. nucleus ядро + ōsis; синоним: болезнь Пфейффера, болезнь Филатова, мононуклеозная ангина, острый доброкачественный лимфобластоз) инфекционная болезнь, протекающая в… … Медицинская энциклопедия

Воображение способность сознания создавать образы, представления, идеи и манипулировать ими; играет ключевую роль в следующих психических процессах: моделирование, планирование, творчество, игра, человеческая память. В широком смысле,… … Википедия

Гемофильная инфекция … Википедия

- [р. 11 (23) янв. 1879] сов. вирусолог, действит. чл. Академии мед. наук СССР (с 1945). Засл. деят. науки РСФСР (1943). Окончил Моск. ун т (1904). Проф., зав. оспенным отделом Ин та эпидемиологии и микробиологии Академии мед. наук СССР. Осн. труды … Большая биографическая энциклопедия

Специфическое взаимодействие антител с соответствующими антигенами, в результате которого образуются комплексы антиген антитело (иммунные комплексы). Часто конечным результатом этой реакции является связывание токсинов, обездвиживание вирулентных … Медицинская энциклопедия

Почти у всех больных с осложнением после переливания несовместимой крови на высоте сенсибилизации, кроме высокого (и очень высокого) титра специфических антител, как вызвавших осложнение, так и появившихся в ответ уже на эту трансфузию, сыворотка крови приобретает свойство склеивать эритроциты почти всех доноров, т. е. вызывать «неспецифическую» агглютинацию эритроцитов, что в этот период чрезвычайно осложняет подбор крови таким больным.

Подводя итог всему сказанному о несовместимости при переливании крови вследствие изосенсибилизации реципиента, можно сделать вывод, что в этих случаях динамика титра антител различается в зависимости от сроков, характера поступления антигена и исходного состояния организма.

У больных, у которых осложнение наступает после первой же трансфузии и предыдущая сенсибилизация обусловлена лишь беременностями, большей частью имеются неполные антитела лишь одной специфичности, чаще всего анти-Rh0(D). Иногда эти антитела наблюдаются и в полной форме, чаще появляясь лишь на 4 — 7-й день после трансфузии. В это же время у некоторых больных образуются слабые неполные и полные антитела анти-rh´(С). Еще реже появляются антитела анти-rh”(Е).

В дальнейшем активность всех антител возрастает, достигая к 15 — 20-му дню наибольших показателей для каждого вида антител. В наиболее высоком титре выявляются антитела, послужившие причиной осложнения. Начиная с 20 — 25-го дня титр всех антител постепенно снижается, а впоследствии они исчезают тем раньше, чем позже появились. Лишь антитела, вызвавшие осложнение, долго (месяцы, годы) сохраняются в титре, превышающем исходное значение.

Несколько иная картина наблюдается у больных, предыдущая сенсибилизация которых была связана как с беременностями, так и с трансфузиями крови. У большинства из них осложнение обусловлено несовместимостью по отношению к двум антигенам, т. е. с самого начала имеется два антитела, чаще всего анти-Rh0(D) и анти- rh´(C). Эти антитела наблюдаются в неполной и довольно часто в полной форме.

Начальный титр их значительно выше, чем у больных описанной выше группы, и также наблюдается большее его повышение. На 7-й день появляются другие антитела. Затем все антитела также постепенно ослабевают и впоследствии исчезают в порядке, обратном их появлению. Но антитела, послулившие причиной осложнения, также долго сохраняются в крови больных в высоком титре.

Третий тип изменений наблюдается у больных с повышенной склонностью к сенсибилизации (чаще всего у страдающих язвенной болезнью). В таких случаях осложнение развивается большей частью на фоне антител одной специфичности, исходный титр которых бывает невелик.

Однако в дальнейшем титр повышается очень резко, достигая исключительно высоких цифр (1:1 000 000 и более). Снижается он столь же резко. При этом иногда наблюдается лишь кратковременное появление других антител.

Остановившись на различиях в серологических сдвигах у больных разных групп, в частности на зависимости их от характера поступления антигена, следует отметить, что все эти изменения соответствуют общим биологическим закономерностям, выражающимся прежде всего в том, что титр антител, послуживших причиной осложнения, достигает максимума к 15 — 20-му дню.

В то же время по мере нарастания сенсибилизации у больных появляются новые антитела против других антигенов, находящихся в перелитой крови. Титр их также возрастает, но значительно отстает от титра антител, послуживших причиной осложнения. Высокий титр антител сохраняется приблизительно до 25-го дня от начала конфликта, после чего постепенно ослабевает.

Антитела, присоединившиеся в течение заболевания, т. е. стимулированные последней трансфузией, исчезают из крови тем раньше, чем позже они появились. К концу 2-го месяца остаются только те антитела, которые послужили причиной осложнения в титре, превышающем исходное значение. Эти антитела долго сохраняются в крови больных.

Таким образом, диагностика осложнений, вызванных переливанием несовместимой крови, базируется на комплексе сведений: на анамнестических данных, клинической Картине заболевания, определении антигенной принадлежности крови больного и донора и показателях специфичности и титра антител в крови больного, полученных при динамическом наблюдении.

Результаты тщательного динамического исследования крови в совокупности с другими сведениями позволяют установить правильный диагноз, а следовательно, провести необходимое лечение.

«Групповые системы крови человека и
гемотрансфузионные осложнения», М.А.Умнова